Fluoro-cytométrie en flux
Avec la cytométrie en flux, nous examinons les cellules et les particules qui passent par un orifice de comptage très étroit.
Dans un premier temps, un échantillon de sang est aspiré et proportionné, puis dilué pour atteindre une teneur prédéfinie et marqué à l'aide d'un fluorochrome qui se lie spécifiquement aux acides nucléiques.
L'échantillon est ensuite transporté dans la chambre de mesure. L'échantillon est illuminé par le faisceau d’un laser semi-conducteur, capable de séparer des cellules au moyen de trois signaux différents :
- diffusion frontale de la lumière (FSC : « forward scatter »)
- diffusion latérale de la lumière (SSC : « side scatter »)
- fluorescence latérale de la lumière (SFL : « side fluorescence light »).
L'intensité de la diffusion frontale indique le volume de la cellule ; la diffusion latérale fournit des informations sur le contenu de la cellule, telles que la taille du noyau ou les granulations. La fluorescence latérale indique la quantité d'ADN et d'ARN que contient la cellule.
Les cellules ayant des propriétés physiques et chimiques similaires forment une population similaire sur un graphique appelé diagramme de dispersion (scattergram).
Pour les numérations des cellules sanguines, nous utilisons la fluoro-cytométrie en flux, pour établir la formule leucocytaire, la numération des érythroblastes et des réticulocytes.
